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Tema 01. ASPECTOS GENERALES SOBRE LOS CULTIVOS CELULARES.
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Historia de los cultivos celulares. Ventajas y desventajas de los cultivos celulares. Aplicaciones en investigación, clínica e industria.
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Tema 02. BIOLOGÍA DE LAS CÉLULAS ANIMALES EN CULTIVO.
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Estructura de la célula animal. Adhesión celular. Citoesqueleto. Metabolismo energético. Requerimientos Nutricionales y factores de crecimiento. Diferenciación/desdiferenciación. Proliferación. Estabilidad genética.
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Tema 03. DISEÑO Y EQUIPAMIENTO DEL LABORATORIO DE CULTIVOS CELULARES.
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Equipamiento y uso de material. Área de trabajo estéril. Cabina de flujo laminar. Incubadores de células. Mantenimiento y normas básicas de seguridad e higiene.
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Tema 04. REQUERIMIENTOS Y CARACTERIZACIÓN DE CULTIVOS CELULARES IN VITRO.
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Requerimientos físico-químicos: temperatura, osmoralidad y pH. Medios de cultivo: características, composición y tipos.
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Tema 05. ESTERILIZACIÓN Y CONTAMINACIÓN
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Preparación del equipamiento. Preparación y esterilización de reactivos, medios y suplementos. Contaminación: fuentes de contaminación. Contaminación cruzada. Controles rutinarios.
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Tema 06. PARAMETROS DE CRECIMIENTO DE LOS CULTIVOS CELULARES.
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Proliferación. Recuento. Viabilidad. Mantenimiento. Criopreservación. Crecimiento en adherencia y en suspensión. Tiempo de doblaje y curva de crecimiento
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Tema 07. TÉCNICAS INSTRUMENTALES Y MÉTODOS DE ANÁLISIS EN LOS CULTIVOS CELULARES.
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Microscopía óptica. Microscopía de fluorescencia y confocal. Microscopía electrónica. Citometría de flujo y Cell Sorter. Otras técnicas de selección de tipos celulares. Análisis del contenido de ADN y proteínas.
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Tema 08. TIPOS DE CULTIVOS CELULARES. CULTIVOS PRIMARIOS
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Cultivos in vivo. Cultivos ex vivo. Cultivos in vitro. Cultivos de tejidos. Cultivos in silico. Concepto de cultivo primario. Disgregación mecánica de los tejidos animales. Enzimas utilizados en la obtención de cultivos primarios. Aislamiento de los distintos tipos celulares.
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Tema 09. LÍNEAS CELULARES.
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Concepto de cultivo primario versus línea celular. Estrategias de obtención de líneas celulares. Potencialidad de las líneas celulares. Diferenciación y transformación de líneas celulares. Subcultivos: Master Cell Bank, Working Cell Bank.
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Tema 10. PROTOCOLOS EN CULTIVOS CELULARES.
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Técnicas de esterilidad y buena práctica en el cultivo de células. Descongelación de líneas celulares. Subcultivo de células adherentes. Subcultivo de células en suspensión. Cultivos en 3D. Cuantificación de células. Criopreservacion de células. Ensayos de contaminación de bacterias, hongos y micoplasmas. Ensayos de viabilidad celular. Ensayos de Proliferación. Cariotipo.
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Tema 11. APLICACIONES DE LOS CULTIVOS CELULARES EN INVESTIGACIÓN
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Expresión de proteínas de fusión: tipos de TAGs. Expresión de proteínas con marcadores fluorescentes. Localización sub-celular de proteínas. Colocalización. Inmunofluorescencia indirecta. Hibridación FISH: marcaje, sondas, metodología y aplicaciones. Estrategias de análisis de los procesos celulares: Ciclo celular: etapas y su regulación, Sincronización. Clases de compuestos inhibidores del ciclo, mecanismos de acción y aplicaciones. Análisis del proceso apoptótico. Uso de cultivos celulares en la caracterización de los ciclos circadianos
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Tema 12. APLICACIONES CLÍNICAS E INDUSTRIALES DE LOS CULTIVOS CELULARES.
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Producción de proteínas con interés en la industria. Obtención hormonas, vacunas y anticuerpos monoclonales. Células madre y medicina regenerativa. Cultivo de células troncales embrionarias y adultas. Cultivo de células troncales de cordón umbilical. Células madre pluripotentes inducidas o céluls iPS (induced pluripotent stem cells)
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